分类： 地球科学 >> 地理学 提交时间： 2020-12-17 合作期刊: 《干旱区研究》
摘要： 松叶猪毛菜（Salsola laricifolia）是典型的荒漠C3-C4中间型植物，隶属于藜科（Chenopodiaceae）猪毛菜属，是研究C4途径进化以及光呼吸减少机制的最佳物种。以松叶猪毛菜无菌苗为试验材料，通过农杆菌介导的瞬时转化方法，分别对质粒载体、苗龄、农杆菌侵染浓度、侵染时间和乙酰丁香酮浓度进行研究，探究各因素对松叶猪毛菜植株瞬时遗传转化效率的影响，以确立最佳的瞬时转化体系；并在上述体系的基础上，过表达松叶猪毛菜叶绿体型NADP-苹果酸酶基因（SaNADP-ME1），通过GUS组织化学染色和荧光定量PCR验证瞬时转化效果。结果表明：（1）采用pCAMBIA1301构建表达载体，以30 d苗龄植株作为转化受体，在侵染液中添加200 μmol·L-1乙酰丁香酮，农杆菌菌液OD600为0.8，侵染6 h条件下，瞬时转化效率最佳（92%）；（2）构建过表达载体并瞬时转化松叶猪毛菜植株，通过染色检测到GUS活性，并且荧光定量PCR检测到SaNADP-ME1的表达量相比对照组显著增高，该基因成功瞬时过表达转化至植株中。综上所述，本试验在松叶猪毛菜植株中建立了一种快速基因功能验证方法，为以后研究松叶猪毛菜功能基因奠定了基础。
分类： 地球科学 >> 地球科学其他学科 提交时间： 2019-09-11 合作期刊: 《干旱区研究》
摘要： 由于新疆野苹果[WTBX](Malus sieversii[WTBZ])果实富含多糖、多酚、可溶性果胶及其他次生代谢物质，导致果实的总RNA提取相对比较困难，质量较差。因此，本试验以不同发育时期的新疆野苹果的果实为材料，采用TaKaRa试剂盒、全氏金试剂盒、田伟等改良的CTAB法、本试验改良的CTAB法(一)和CTAB法(二)这5种方法来摸索提取野苹果果实的总RNA的有效方法。结果表明：2种试剂盒均无法从野苹果果实中提取出RNA；通过3种改良CTAB法提取的RNA，在琼脂糖凝胶上得到清晰的28S和18S条带，并且纯度均较高， OD260/OD280值在1.8~2.2之间、OD260/OD230值大于2.0。但是只有本试验改良CTAB法(一)获得较高的RNA产量，从5个不同发育时期的野苹果果实中提取的RNA平均值在116.79~474.76 μg·g-1。改良CTAB法(一)通过延长LiCl沉淀时间，将-20 ℃放置15 min改为4 ℃放置过夜(时间不超过16 h)，可以有效地除去RNA中的杂质污染，使得RNA充分沉淀。这种改良方法耗时相对较长，需要2 d，但是方法易于操作且提取成本较低。因此，改良CTAB法(一)是适用于提取野苹果果实(尤其是发育晚期)总RNA的有效方法，完全可以满足后期的分子生物学试验所需。
点击量
点击量
下载量
评论
